Obiettivi formativi
Durante questo corso, allo studente verranno fornite conoscenze sistematiche sulle principali tecniche di ricerca riguardati la biochimica delle proteine e la proteomica . Le conoscenze impartite riguarderanno le metodologie per l’identificazione, l’isolamento, e lo studio strutturale e funzionale delle proteine, nonché gli strumenti intellettuali per l'analisi dei risultati e per la loro descrizione. Inoltre, verranno descritte le tematiche di cui si occupa la proteomica, e le strategie e le tecniche principali impiegate all’interno di questa disciplina. Le conoscenze saranno verificate nel corso di esami scritti in cui si chiederà allo studente di descrivere le metodologie nei dettagli e di
riconoscere come e quando utilizzarle.
Prerequisiti
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Contenuti dell'insegnamento
I tamponi biochimici.
Estrazione e purificazione di proteine.
Tecniche cromatografiche: cromatografia di gel filtrazione, di scambio ionico, di scambio idrofobico e di affinità.
Elettroforesi di proteine: nativa, SDS-PAGE, isoelectrofocusing, 2D-PAGE.
Tecniche immunochimiche: immunoprecipitazione, tecniche ELISA, Western blotting.
Tecniche di spettroscopia ottica e loro applicazioni: assorbimento, spettrofluorimetria e dicroismo circolare.
Nozioni di base sulla spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR).
Nozioni di base sull’uso dei radioisotopi nella ricerca biochimica.
Saggi enzimatici: tecniche continue e discontinue di misurazione delle reazioni. Metodi basati sulle reazioni accoppiate. Unità di attività.
Spettrometria di massa: sistemi di ionizzazione e metodi di analisi (rivelatori a deflessione magnetica, a quadrupolo, a tempo di volo, orbitrap, rivelatori in tandem).
La proteomica, concetti generali.
Proteomica sistematica e basi metodologiche dell’approccio proteomico: elettroforesi mono- e bi- dimensionale di proteine; spettrometria di massa accoppiata all’analisi di banche dati. Studio proteomico delle modificazioni post-traduzionali.
Proteomica differenziale e proteomica funzionale: esame dettagliato di alcuni esempi significativi di approcci proteomici allo studio di problemi biologici. Cenni di enzimomica e di metabolomica.
Programma esteso
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Bibliografia
Le informazioni sulle tecniche biochimiche potranno essere reperite su testi quali:
Bonaccorsi, Contestabile, Di Salvo, Metodologie Biochimiche, Casa Editrice Ambrosiana;
Reed, Holmes, Weyers & Jones, Metodologie di base per le scienze biomolecolari,
Zanichelli. Per gli argomenti di proteomica, gran parte delle lezioni si
baseranno su articoli scientifici (in inglese) messi a disposizione degli
studenti.
Metodi didattici
Il corso si articolerà su lezioni frontali, in cui saranno illustrate – anche con il supporto di mezzi audiovisivi - le principali metodologie riguardanti la biochimica delle proteine e la proteomica.
Modalità verifica apprendimento
Le conoscenze acquisite, nonché la capacità di utilizzarle in pratica, sono
verificate nel corso di una prova scritta. Il test includerà una sezione con 15 quiz a risposte multiple ed una sezione con due domande aperte. I quiz a risposta multipla serviranno principalmente per valutare la conoscenza acquisita e la comprensione. Per quanto riguarda le domande aperte, gli studenti saranno invitati a descrivere dettagliatamente alcune tecniche specifiche trattate nel corso e soprattutto a riconoscere come e quando impiegare tali tecniche. Ciò servirà a valutare la capacità di applicare la conoscenza e la comprensione, nonchè l'autonomia di giudizio e la capacità di comunicare idee e concetti con chiarezza e proprietà del linguaggio.
Nella sezione dei quiz a risposte multiple, agli studenti verrà assegnato un punto per ogni risposta esatta (punteggio massimo nella sezione: 15). Per quanto riguarda le domande aperte, a ciascuna di esse sarà associato un punteggio compreso tra 0 e 7.5 (punteggio massimo nella sezione: 15).
Il voto finale (scala 0-30) rappresenterà la somma dei punteggi per le due sezioni. La lode verrà assegnata in caso di raggiungimento del massimo punteggio in ciascuna delle due sezioni, a cui si aggiunga una evidente padronanza del lessico disciplinare.
Altre informazioni
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