Obiettivi formativi
Fornire conoscenze basilari su alcune tecniche spettroscopiche avanzate oggi in uso nella biofisica macromolecolare
Prerequisiti
Esami di laboratorio di biofisica I e II
Contenuti dell'insegnamento
<br />Lab. Biof. IV <br />D) Fluorescenza<br />Lezioni teoriche:<br />FRET (fluorescence resonance energy transfer): teoria di Foerster<br />FRET risolta in tempo<br />Anisotropia di fluorescenza <br />Esercitazioni:<br />Spettri di fluorescenza di una coppia donatore-accettore<br />FRET di una coppia legata ad una macromolecola (misure in ensemble)<br />Anisotropia di fluorescenza di un fluoroforo libero e legato.<br /> <br />E) Spettroscopia di singola molecola<br />Lezioni teoriche:<br />Principi di microscopia confocale<br />Principi di spettroscopia di correlazione di fluorescenza (FCS)<br />FRET su singola coppia (spFRET)<br />Esercitazioni:<br />Microscopio confocale: determinazione del volume confocale<br />FCS di un fluoroforo libero e legato (misure in singola molecola)<br />spFRET in una singola molecola di dsDNA.
Bibliografia
D) Fluorescenza<br />- C.R.Cantor, P.R.Schimmel: Biophysical Chemistry, Vol. 2, W.H.Freeman 1980<br />- J.R.Lakowitz: Principles of fluorescence spectroscopy, Plenum 2000<br />- P.R.Selvin: The renaissance of FRET, Nat. Struct. Biol. 7, 730-734 2000.<br />E) Spettroscopia di singola molecola<br />- Ch. Zander, J. Enderlein, R.A. Keller: Single molecule detection in solution, Wyley-VCH 2002<br />- B. Valeur, J.C. Brochon: New trends in fluorescence spectroscopy, Springer-Verlag 2001<br />- A. Cooper: Biophysical Chemistry, RCS 2004.
Metodi didattici
<br />Esame orale sugli argomenti di teoria e sulle relazioni relative alle esercitazioni di laboratorio svolte