Obiettivi formativi
<br /><br />Il corso si propone di introdurre i principi e le tecniche avanzate dell'ingegneria genetica, inclusa la realizzazione di organismi transgenici.
Prerequisiti
Si richiede il superamento dell'esame di Biologia Molecolare degli Eucarioti e Ingegneria proteica
Contenuti dell'insegnamento
- Clonaggio genico in batteri diversi da E.coli.<br />
- Espressione di proteine eterologhe in B.subtilis.<br />
- Espressione di proteine eterologhe in Streptomyces.<br />
- Clonaggio genico in S.cerevisiae e altri funghi.<br />
- Espressione di proteine eterologhe in S.cerevisiae.<br />
- Espressione di proteine eterologhe in P.pastoris.<br />
- Preparazione di genoteche di espressione in lievito.<br />
- Complementazione funzionale in S.cerevisiae.<br />
- Knock-out genico in lievito.<br />
- Sistema dei due ibridi.<br />
- Clonaggio genico in cellule animali.<br />
- Vettori plasmidici per l’espressione transiente(con e senza repliconi).<br />
- Vettori plasmidici per l’espressione stabile (con repliconi e di integrazione).<br />
- Co-trasformazione e amplificazione genica.<br />
- Effetto posizione e rimedi.<br />
- Trasduzione virale.<br />
- Sistema del baculovirus e del virus vaccinia.<br />
- Adenovirus, AAV e retrovirus.<br />
- Preparazione di animali transgenici.<br />
- Trasfezione di cellule ES di topo.<br />
- Trasferimento nucleare e clonaggio di interi organismi.<br />
- “Gene-targeting" e "knock-out" genico in animali.<br />
- Ricombinazione sito-specifica in cellule animali.<br />
- Mutagenesi sito-specifica in cellule animali.<br />
- Ingegneria cromosomica.<br />
- Mutanti condizionali in topo.<br />
- Knock-out funzionale (RNA interference, ribozimi).<br />
- Sistemi di espressione inducibili in animali.
Programma esteso
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Bibliografia
Ingegneria genetica (pricipi e tecniche)<br />S.Primrose, R.Twyman, B.Old (Zanichelli)<br /><br />DNA Ricombinante<br />J.D.Watson et al. (Zanichelli)
Metodi didattici
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Modalità verifica apprendimento
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Altre informazioni
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