Obiettivi formativi
Durante questo corso, allo studente verranno fornite conoscenze
sistematiche sulle principali tecniche impiegate nel laboratorio di
biochimica .
Le conoscenze impartite riguardano metodologie per l’identificazione, l’
isolamento, e lo studio strutturale e funzionale delle macromolecole
biologiche, nonché strumenti intellettuali per l'analisi dei risultati e per la
loro descrizione. Le conoscenze sono verificate nel corso di esami scritti
in cui si chiede allo studente di descrivere le metodologie nei dettagli e di
riconoscere come e quando utilizzarle.
Prerequisiti
Corsi di base in Fisica, Chimica, Microbiologia e Biochimica
Contenuti dell'insegnamento
Omogeneizzazione delle cellule e frazionamento cellulare. Tamponi
biochimici.
Tecniche centrifugative: centrifugazione differenziale e in gradiente di
densità.
Estrazione e purificazione di proteine.
Tecniche cromatografiche: cromatografia di gel filtrazione, di scambio
ionico, di scambio idrofobico e di affinità. HPLC.
Tecniche elettroforetiche: princìpi ed applicazioni. Elettroforesi di
proteine: nativa, SDS-PAGE, isoelectrofocusing, 2D-PAGE. Elettroforesi di
acidi nucleici
Tecniche immunochimiche: immunoprecipitazione, tecniche ELISA,
Western blotting.
Tecniche di spettroscopia ottica e loro applicazioni: assorbimento,
spettrofluorimetria e dicroismo circolare.
Spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR).
Immunochimica: immunoprecipitazione, tecniche ELISA e Western
Blotting.
I radioisotopi nell’analisi biochimica: rivelatori Geiger-Muller, la
scintillazione liquida, autoradiografia, phosphorimaging.
Saggi enzimatici: tecniche continue e discontinue di misurazione delle
reazioni.
Metodi basati sulle reazioni accoppiate. Unità di attività.
Spettrometria di massa: sistemi di ionizzazione e metodi di analisi
(rivelatori a deflessione magnetica, a quadrupolo, a tempo di volo,
orbitrap, rivelatori in tandem). Impieghi biochimici della spettrometria di
massa.
Programma esteso
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Bibliografia
Bonaccorsi di Patti, Contestabile, Di Salvo. Metodologie biochimiche, Casa
editrice Ambrosiana
Reed, Holmes, Weyers & Jones, Metodologie di base per le scienze
biomolecolari, Zanichelli
Metodi didattici
Il corso si articola su lezioni frontali.
Modalità di
Modalità verifica apprendimento
Le conoscenze acquisite, la capacità di utilizzarle in pratica, sono
verificate nel corso di un esame finale scritto, articolato in una sezione di
quiz a risposta multipla ed in una sezione di domande a risposta aperta.
Tramite i test a risposta multipla saranno verificate soprattutto le
conoscenze acquisite e la capacità di comprendere. Nelle domande a
risposta aperta, dove lo studente dovrà rispondere scrivendo un testo
relativamente esteso su specifici argomenti o problemi, verranno
valutate le capacità di applicare conoscenza e comprensione, nonchè
l'autonomia di giudizio e la capacità di esporre idee e analisi con chiarezza
e proprietà.
Altre informazioni
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